固相多肽合成树脂的特征和进展(二)
2017-10-24

     4、固相多肽合成树脂和其它一些进展 

   除了以上三种普遍类型的固相载体,还有许多其它的载体被提出来并得到了有价值的应用。包括一些碳水化合物、接枝PEG聚酰胺、控制细孔度的硅玻璃和PE薄片等。而近年来的研究工作已从单纯的合成肽链,向功能化和自动化转变。 

   如上面提到的应用于免疫学和多肽文库的合成,这方面的工作有Teggy W和Frank R[15] 用于1,3-二氨基丙烷修饰Hi Trap琼脂糖凝胶,并接上一个酰胺接头得到的载体,McMurray JS[16] 用水相容性的聚丙烯酰胺类树脂,加上一个不裂解的接头,然后在固相载体上合成出目的多肽。将结果肽-树脂注射进动物以引出抗肽免疫反应。Buettner JA和Dadd CA[17] 等发展了一种新的亲水性树脂。这种树脂能用于多肽合成,以及直接估价为目标蛋白质而化合的多肽文库。他们用一个两色“多肽文库免疫印迹色谱分析”(PELICAN)技术来探测合成出的多肽文库顺序。Sebestyten F[18] 等亦提出了发展有色多肽和多肽文库的方法。Mery J等研究了二硫键作为Boc-Bzl SPPS 的多肽-树脂接头,认为这种方法具有生物化学上的应用潜力。直接将多肽偶联在活性蛋白载体上,可能应用于抗体的产生。 

   其它方面,Lloyd-Williams P等用了一个光不稳定的树脂,合成了一个完全被保护的八肽,此肽包含一个Met残基,他们指出在用光裂解时,此Met可以避免被氧化[20]。 

   Englebrestn DR和Harding DR用氨丙基Perloza小珠纤维做载体,通过一个对TFA不稳的4-甲氧基苯氧乙酰基(HMPA)接头进行Fmoc SPPS[21]。他们进行了连续流动和间歇式合成,并同一个PS载体和标准化的(ABI Fastmoc)SPPS方案合成出的一些肽进行了比较。他们关于Perloza工作的全面目标是为亲合色谱法和抗体产生了比较。他们关于Perloza工作的全面目标是为亲合色谱法和抗体产生出树脂束缚的多肽配位体。他们还于1993年将这种多肽树脂应用于从粗重组培养基中分离出的凝乳酶[22]。 

   Zuckermann RN和Banville SC[23]建立了一个机器人工作站,使去除对TFA不稳的侧链保护基团从酸不稳定树脂上裂解下多肽实现自动化。工作站建立在一个Zymark机器人手臂周围,并同一个多肽合成工作站连在一起。肽树脂样品用一个TFA/清除剂混合液来去保护和裂解。混合液适合所有通常的用Fmoc化学的保护基团。用水-醚连续抽提移走清除剂和反应副产物。设备每2hr裂解一个50-500mg的肽树脂样品,同时为肽提供一个10%Hac水溶液。用此设备得到的粗肽与残留的清除剂分开,产率在50-80%范围内。这种方法除了疏水的多肽外,对其他所有的多肽都适用;而且它最大程度地减少了人接触有毒的裂解试剂的机会。


4、展望 

   固相多肽合成已经有近40年的历史了;然而到现在,人们还只能合成一些较短的肽链,更谈不上随心所欲地合成蛋白质了,同时合成中的试剂毒性,昂贵费用,副产物等一直都是令人头痛的问题,而在生物体内,核糖体上合成肽链的速度和产率都是惊人的,那么,是否能从生物体合成蛋白质的原理上得到一些启发,应用在固相多肽合成(树脂)上?这是一个令人感兴趣的问题,也许是今后多肽合成的发展方向。


参考文献 

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